• Bis zu 4 Reads pro Probe können definiert werden
• Hohe Leselängen von bis zu 1.100 Basen
• Kostenlose Einzelstrangdaten überwacht auf Q20, Q30 oder Q40
• DNA-Aufbereitung und PCR-Reinigung optional
• Erweiterte Optionen für komplexe Sequenzregionen oder Bisulfit-Proben (Extended Cycle Sequencing, Special Chemistry) können pro Reaktion ausgewählt werden
• Übrige DNA kann auf Wunsch zurückgesendet werden
• Verschiedene Sequenzdateiformate wählbar
• Kostenlose einmalige Wiederholung im Falle eines technischen Fehlers
• Platten können verschiedene Arten von gereinigter DNA enthalten
• Einfache Nachbestellung von kompletten Platten oder einzelnen Proben

Anweisungen für Plasmid-DNA, gereinigte PCR-Produkte und vorgemischte Proben – PlateSeq Kit DNA

• Verwenden Sie unser PlateSeq Kit DNA für gereinigte DNA oder vorgemischte Proben
• Alternativ kann die 96-Well PCR-Platte aus unserem Zubehör verwendet werden
• Platten mit gereinigter DNA können Plasmide und PCR-Produkte enthalten
• Die Template-Konzentration muss über die Platte normalisiert sein
• Well H12 sollte für die interne Qualitätskontrolle frei bleiben
• DNA-Proben sollten flüssig in einem Gesamtvolumen von 15 µl eingeschickt werden
• Platten mit 8-Cap-Strips versiegeln, um Materialverlust zu vermeiden
• Bei Verwendung eigener Platten: vollrandige PCR-Platten und PlateSeq Labels verwenden
• Proben bei Raumtemperatur an unser Sequenzierlabor versenden

Quantifizieren Sie die Template-Konzentration mittels Agarosegel oder Photometer, um genaue Ergebnisse zu gewährleisten.

Vorgemischte Proben (DNA + Primer):

• Templates sollten aus 15 µl gereinigter DNA gemäß obiger Tabelle bestehen
• Fügen Sie 2 µl Primer mit 10 pmol/µl hinzu
• Gesamtvolumen der vorgemischten Probe: 17 µl

Anweisungen für ungeklärte PCR-Produkte – PlateSeq Kit PCR

• Verwenden Sie unser PlateSeq Kit PCR oder die 96-Well PCR-Platte aus unserem Zubehör
• Konzentration muss über die Platte normalisiert sein
• PCR-Produktgröße sollte sich nicht um mehr als den Faktor 3 unterscheiden
• Well H12 sollte für interne Qualitätskontrolle frei bleiben
• PCR-Produkte flüssig in 15 µl einschicken
• Platten mit 8-Cap-Strips versiegeln
• Bei Verwendung eigener Platten: PlateSeq Labels verwenden
• Proben bei Raumtemperatur versenden

Template-Konzentration mittels Agarosegel oder Photometer überprüfen.

Anweisungen für Plasmidklone als Stabkultur auf Agar – PlateSeq Kit Clone

• PlateSeq Kit Clone oder Agarplatten mit passendem Antibiotikum verwenden
• Sterile Zahnstocher verwenden, einzelne Kolonien auf Platte übertragen
• Platte abdecken und locker mit Zellophan umwickeln
• Platte bei 37 °C für 8–12 Stunden (über Nacht) inkubieren
• Bei eigenen Platten: PlateSeq Labels verwenden
• Platte mit Klebefolie versiegeln und Stabkulturen bei Raumtemperatur versenden

Anweisungen für Plasmidklone als Gefrier-Glycerolkulturen:

• Nur transparente 96-Well-Mikrotiterplatten mit 350 µl Gesamtvolumen/Well verwenden
• Jedes Well mit 200 µl Flüssigmedium + Antibiotikum füllen, 40 µl Glycerol hinzufügen (Endkonzentration 10–20 %)
• Nur in Glycerol gelagerte Flüssigkulturen versenden
• Sterile Zahnstocher verwenden, einzelne Kolonien übertragen oder bereits arrayierte Klone aus Lagerplatten in frische 96-Well-Platten überführen
• Platte locker abdecken und 37 °C für 8–12 Stunden (über Nacht) inkubieren
• Plattensurface trocknen lassen, dann manuell mit Klebefolie fest verschließen
• Platte mit Bestellnummer und Plattennamen kennzeichnen
• Platte bei -80 °C einfrieren
• Glycerolkulturen auf ausreichend Trockeneis versenden, um Probenverlust zu vermeiden

Dank unseres DNA-Syntheselabors, bioinformatischem Know-how und internen IT-Lösungen können Sie wählen, wie Sie uns Ihre Sequenzierungsprimer bereitstellen:

• Aus standardmäßigen Primern aus dem Lager auswählen
  Wählen Sie Ihre bevorzugten Standard-Primer aus über 80 validierten Sequenzierungsprimern und verwalten Sie diese.
• Bestellung spezifischer Sequenzierungsprimer
  Spezifische Primer können direkt zusammen mit Ihrer Sequenzierungsbestellung geordert werden. Diese Primer werden für 4 Wochen gelagert (auf Wunsch bis zu einem Jahr) und können in dieser Zeit wiederverwendet werden.
• Eigene Sequenzierungsprimer beilegen
  Sie können Ihre Primer in 1,5 ml Röhrchen zusammen mit Ihren Proben einsenden, indem Sie unsere kostenlosen Primer-Barcodes verwenden. Beiliegende Primer werden 10 Tage lang gelagert.
• Primer mit DNA-Template vorgemischt
  Sequenzierungsprimer können direkt mit Ihrem DNA-Template gemischt und als vorgemischte Probe eingeschickt werden.

Bitte beachten Sie die optimalen Primerbedingungen, Konzentration und Volumen, wie unten beschrieben.

Optimale Primerbedingungen:

• Primer dürfen keine Phosphorylierung oder fluoreszierende Farbstoffe enthalten
• Optimale Primerlänge: 16–25 Basen
• Primer-Schmelztemperatur (Tm): 50–62 °C
• GC-Gehalt: 35–60 %
• Idealerweise ein G oder C am 3'-Ende des Primers
• Maximal 2 Gs oder Cs am 3'-Ende
• Wenn möglich, vermeiden Sie >3 identische Basen in Folge

Primerkonzentration und Volumen für beiligende Primer:

• Exakt 10 pmol/µl Primerkonzentration pro Sequenzierungsreaktion erforderlich
• Jeder Primer muss ein Gesamtvolumen von 20 µl haben (ddH₂O oder 5 mM Tris-HCl); 2 µl Primer pro zusätzlicher Sequenzierungsreaktion
• Primer mit Wobble-Basen: Konzentration berechnen nach Formel: n^X x ConcPrimer

n = Anzahl der Basen innerhalb eines Wobbles gemäß IUPC-Code, X = Anzahl der Wobbles innerhalb der Primersequenz. [z. B. 1 V (AGC) = 3¹ x 10 pmol/µl; 2 Y (CT) = 2² x 10 pmol/µl; 1 N (AGCT) = 4¹ x 10 pmol/µl]

DNA- und Primerlagerung:

• Lagerung der Template-DNA für 4 Wochen
• Lagerung synthetisierter Primer für 4 Wochen kostenlos
• Lagerung synthetisierter Primer für ein Jahr gegen Aufpreis
• Lagerung beiligender Primer für 10 Tage kostenlos
• Lagerung beiligender Primer für 6 Monate gegen Aufpreis

Datenspeicherung:

• Sicheres Online-Archiv aller ausgewählten Sequenzdaten für 6 Monate

Definition eines technischen Fehlers

Ein technischer Fehler wird als chemischer oder technischer (IT, Maschinen) Defekt in unserem Labor definiert. Um sicherzustellen, dass die Sequenzierqualität durch einen technischen Fehler nicht beeinträchtigt wird, wird bei jeder Platte eine interne Qualitätskontrolle durchgeführt (zu diesem Zweck muss das Well H12 frei bleiben; andernfalls ist eine Qualitätskontrolle nicht möglich). Zusätzlich analysiert eine ausgeklügelte Software jede Platte unter Berücksichtigung von Parametern wie Qualitätswerten (QV) und Leselängen. Wenn diese Parameter auf der gesamten Platte unter einen bestimmten Schwellenwert fallen, wird eine zusätzliche manuelle Überprüfung durchgeführt. Wird ein technischer Fehler durch diese manuelle Kontrolle bestätigt, wird die Platte erneut sequenziert.

Wichtige Informationen:

Die angegebenen Lieferzeiten hängen hauptsächlich vom Eintreffen der Proben im Labor ab.

Für viele europäische Städte bieten wir koordinierte Abhol- und Transportdienste über Eurofins DropBoxes an, um eine pünktliche Lieferung im Labor zu gewährleisten.

Diese Logistikdienste können jedoch auch von höherer Gewalt oder unvorhersehbaren Ereignissen wie z. B. Streiks, Unfällen, Stürmen oder Überschwemmungen betroffen sein. In solchen Fällen kann Eurofins Genomics die angegebenen Lieferzeiten nicht garantieren und ist nicht verantwortlich für Verzögerungen, die durch Logistikdienste entstehen.

Zusätzlich gelten unsere allgemeinen Geschäftsbedingungen (AGB).