Quantitative Bewertung
Bevorzugte Messmethode: fluoreszenzbasierte Methoden wie Qubit® (Invitrogen, Life Technologies), Quant-iT™ (Invitrogen) oder Quantifluor (Promega).
Wir raten dringend davon ab, Nanodrop zur Quantifizierung von gDNA zu verwenden.
HMW gDNA erfordert oft zusätzlichen Homogenisierungsaufwand (längere Inkubationszeit, erhöhte Inkubationstemperatur, sehr gründliches sanftes Mischen usw.), um eine genaue Quantifizierung zu erhalten. Wenn separate DNA-Quantifizierungen von oben und unten der Probe innerhalb von 15% voneinander liegen, ist dies normalerweise ein gutes Indiz für eine ausreichende Homogenität.
Wenn Sie weniger als die geforderte Menge an gDNA haben, empfehlen wir dringend, zusätzliche Extraktionen durchzuführen, um die Ausbeute zu erhöhen.
Qualitative Bewertung
Bevorzugte Messmethode: kapillarelektrophoresebasierte Methoden wie Fragment Analyzer oder Bioanalyzer. Hochmolekulare DNA ist größer als 15 kb und zeigt minimale Schmierung. Kontamination, Schäden und Abbau werden durch ein niedrigmolekulares Schmiermuster sichtbar und sollten mit alternativen Reinigungsstrategien wie oben beschrieben entfernt werden.