Ultimate Precision Probes

Was Sie von unseren Ultimate Precision Probes erwarten können

• Sonden mit internem BHQ1 oder BHQ2 Quencher zwischen der 9. und 10. Base
• Große Auswahl an 5'-Farbstoffen
• 3'-Phosphatmodifikation zur Gewährleistung der Sondenstabilität
• 2'-Desoxyinosin [I], 2'-Desoxyuridin [U], 5'-Methyl-dC [5MedC] als interne Modifikation verfügbar
• Locked Nucleic Acid (LNA) Basen für die Optimierung der Schmelztemperatur verfügbar
• DNA-Sequenzlänge von 10 bis 40 Basen
• Reinigung mit neu entwickelter hochauflösender HPLC-Methode
• Sicherstellung der Qualität durch MALDI-TOF-Massenspektrometrie
• Lieferung der Sonden entweder lyophilisiert oder in definierter Konzentration
• Auswählbare Lösungsmittel sind destilliertes Wasser oder TE-Puffer (10 mM Tris, 1 mM EDTA; pH=8)
• Vollständige Flexibilität hinsichtlich Ihrer Mengen: Geben Sie einfach die benötigte Ausbeute in pmol oder nmol an
• Schnelle Lieferzeiten ab 8 - 10 Arbeitstagen

Optionale Dienstleistungen:

• Benutzerdefinierte Normalisierung oder Aliquotierung
• Benutzerdefinierte Lösungsmittel
• Benutzerdefinierte Tubes
• Analysenzertifikat (CoA) pro Oligo oder pro Auftrag

Bitte beachten Sie, dass Ultimate Precision Probes für die qPCR-Analyse empfohlen und optimiert sind. Für Genotypisierungsassays empfehlen wir unsere Dual Labeled Probes.

In qPCR-Experimenten zeigen Ultimate Precision Probes einen geringeren Hintergrund und eine höhere normalisierte Fluoreszenz im Vergleich zu herkömmlichen dual-markierten Standardsonden (repräsentative Daten in Abbildung 1A und B). Insbesondere zeigen die Ultimate Precision Probes nach der Normalisierung eine höhere Endpunktfluoreszenz und häufig frühere Ct-Werte, wodurch die Genauigkeit und die Robustheit des qPCR Assays erhöht werden.

Noch beeindruckender ist, dass Ultimate Precision Probes mit internen BHQ1 und BHQ2 eine so starke Quenching-Effizienz aufweisen, dass die Leistung vergleichbar mit ihren doppelt gequenchten Derivaten ist. Aber im Vergleich zu Sonden mit zwei Quenchern sind die Komplexität in der Herstellung und Analyse und die damit verbundenen zusätzlichen Kosten mit den Ultimate Precision Probes geringer.

Alle unsere Ultimate Precision Probes werden mit unserer neu entwickelten IP-RP HPLC-Methode mit optimierten Lösungsmittelsystemen gereinigt. Dies trägt ebenfalls zu einem reduzierten Hintergrundsignal bei. Die erhöhte Auflösung ermöglicht eine bessere Auftrennung des Ziel-Oligonukleotids von seinen Nebenprodukten und steigert damit die Reinigungseffizienz erheblich.

Für weitere Informationen zu den neuen Ultimate Precision Probes lesen Sie bitte die entsprechende Application Note.

Abbildung 1. Verbesserte Quenching-Effizienzen unter Verwendung von Ultimate Precision Probes mit einem einzigen internen Quencher: Amplifikationskurven der qPCR-Ergebnisse für Verdünnungsstufe 6 (10⁴ Zielkopien) für das N-Gen in unserem SARS-CoV-2-Modellsystem. Alle Sonden sind mit dem 5'-FAM-Fluorophor und BHQ1 markiert. Es werden verschiedene Sondenlayouts verglichen. (A) Amplifikationsdiagramm ohne Hintergrundkorrektur (Rohdaten), (B) Amplifikationsdiagramm mit Hintergrundkorrektur (normalisierte Daten). Primerkonzentration (760 nmol/L); die blaue Linie entspricht der Standardsonde mit 3'-Quencher; die rote Linie entspricht der doppelt gequenchten Sonde; die grüne Linie entspricht der Ultimate Precision Probe und die schwarze Linie entspricht der doppelt gequenchten Sonde eines Mitbewerbers (Mittelwert von drei Experimenten). Alle Reaktionen wurden unter Verwendung eines Roche LightCycler 480 mit der LightCycler 480 Datenanalysesoftware durchgeführt (vgl. Roche, 2008).