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NGSgrade Oligos - Das nächste Level

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NGSgrade Oligos 2.0 - Die nächste Stufe von unseren NGSgrade Oligos

 
Ausgiebig getestet und für überlegen befunden.

 

NGS-Oligonukleotide, insbesondere aber Index-Adapter-Oligonukleotide, müssen höchste Qualitätsanforderungen erfüllen. Es ist wichtig, dass sie ein absolutes Minimum an anderen Adapterprimern enthalten. Kreuzkontaminationen können zu Fehlzuordnungen von Sequenzier-Reads zu anderen Proben führen. Damit kann es zu Fehlern in der Dateninterpretation kommen.


Eurofins Genomics hat ein neues Syntheseverfahren entwickelt, das die Kreuzkontaminationsrate im Vergleich zu den bisher auf dem Markt angebotenen Oligos für NGS-Anwendungen erheblich reduziert (siehe Application Note). Mit typischen Werten von 0,01 – 0,05 % liegt die Kreuzkontaminationsrate von NGSgrade 2.0 Oligonukleotiden auf einem marktführenden Niveau. NGSgrade 2.0 Oligos sind daher die perfekte Wahl für die Erstellung von NGS-Bibliotheken mit Index Adaptor Oligonukleotiden, wenn mehrere Proben auf einem Lauf sequenziert werden sollen. .

 

NGSgrade 2.0 in Tubes bestellen

NGSGRADE Oligos in Tubes bestellen

Angebot für NGS Oligos in Platte

 

Die neuen NGSgrade Oligos 2.0 im Überblick


Proprietäre Synthese- und Reinigungstechnologie für niedrigste Kreuzkontaminationsraten:

  • Kreuzkontaminationsraten von nur 0,01 - 0,05 %.
  • Wir empfehlen diese Oligos für alle Arten von Index Adaptor Oligos, wie z.B. UDIs oder UDI-UMIs, bei denen Kreuzkontaminationen bei einer falschen Zuordnung von NGS-Reads zu einer fehlerhaften Dateninterpretationen führen können.
  • Beste Wahl als NGS Oligos für NovaSeq und MiSeq

Traditionelle NGSgrade Oligos im Überblick


HPLC gereinigte NGS Oligos, mit spezifischem kreuzkontaminationsfreien Prozess:

  • Spuren einer Kreuzkontamination mit co-synthetisierten Oligos können nicht vollständig ausgeschlossen werden.
  • Diese Oligos sollten für NGS-Anwendungen verwendet werden, bei denen geringe Kreuzkontaminationen akzeptabel sind und stattdessen höchste Oligo-Reinheit ein wesentlicher Faktor ist.

 

Hauptunterschiede zwischen den neuen NGSgrade 2.0 Oligos und den traditionellen NGSgrade Oligos:

 

Feature Neue NGSgrade Oligos 2.0  Traditionelle NGSgrade Oligos
Kreuzkontaminationsrate Beste Marktwerte: Typischerweise: 0,01 - 0,05 %* Nicht angegeben
Ausbeute-Optionen Minimum 4 nmol, 10 nmol & 25 nmol 3 Synthese-Maßstäbe mit Mindestausbeuten in OD
Oligo Reinheit Typischerweise 70 – 80 % für einen UDI - Primer mit 72 Basen Typischerweise > 80% für einen UDI - Primer mit 72 Basen
Oligo Modifikationen PTO, 2’-Desoxyinosin, 2’-Desoxyuridin und 5’-Phosphat PTO, 2’-Desoxyinosin, 2’-Desoxyuridin und 5’-Phosphat
Lieferzeit Ab 8 Werktage je nach Spezifikation 5-7 Werktage bis 60 mere
10 Werktage ab 61 mere
Referenz Wird derzeit im NGS-Labor von Eurofins Genomics für UDI-Adapterprimer verwendet Zuvor im NGS-Labor von Eurofins Genomics für UDI-Adapterprimer verwendet
 

>> FAQ's OligonuKleotide

>> FAQ's Next Gen Sequencing

NGS oligos für MiSeq

NGS oligos für NovaSeq

 

 

Weiterführende Informationen

 

 

Spezifikationen NGSgrade Oligos 2.0

Was Sie von unseren NGSgrade Oligos 2.0 erwarten können

 

  • Typische Kreuzkontaminationsrate von 0,01 % bis 0,05 %, bestätigt durch unser NGS-Labor (siehe Kreuzkontaminationsrate)
  • Verfügbare Mindestmengen von 4 nmol, 10 nmol und 25 nmol
  • DNA-Sequenzlänge von 15–120 Basen
  • Verfügbare Modifikationen sind PTO-Bindungen, 2’-Desoxyinosin, 2’-Desoxyuridin und 5’-Phosphat
  • Die Qualität wird durch OD-Messung und ESI-MS (Elektrospray-Ionisations-Massenspektrometrie) sichergestellt.
  • Ein Online-Qualitätsbericht, einschließlich der ESI-MS-Spektren, kann bestellt werden
  • Auswählbare Lösungsmittel sind bidestilliertes Wasser, TE-Puffer (10 mM Tris, 1 mM EDTA; pH = 8) oder Low EDTA Puffer (10 mM Tris, 0,1 mM EDTA, pH = 8)
  • Schnelle Lieferzeiten ab 8 Arbeitstagen

 

Zur Lieferung in Tubes:

  • Oligos werden in 2ml Tubes mit Schraubverschluss entweder lyophilisiert oder in flüssiger Form in der ausgewählten Konzentration geliefert

 

Zur Lieferung in Platten:

  • Oligos werden in der ausgewählten 96-Well-Platte in flüssiger Form in der definierten Konzentration geliefert
  • Es sind mindestens 20 Oligos pro 96-Well-Platte erforderlich

 

 

 

Kreuzkontaminationsrate NGSgrade Oligos 2.0

 

Die Kreuzkontaminationsrate von 0,01 bis 0,05 % wurde durch Sequenzierung repräsentativer Sets von Unique Dual Index (UDI)-Primer-Paaren unter Verwendung von Illumina-Instrumenten in der europäischen NGS-Sequenzierungsanlage von Eurofins Genomics bestimmt. Die angegebene Rate stellt den typischen Gesamtprozentsatz der Lese-Paare dar, die nicht den erwarteten UDI-Kombinationen für einen Satz von 96 UDI-Primer-Paaren entsprechen. Die entsprechende Anwendungsnotiz zeigt eine Kreuzkontaminationsrate von 0,0014 % für einen Satz von 14 UDI-Primer-Paaren.

 

Bitte beachten Sie, dass die Gesamtkreuzkontaminationsrate (Prozentsatz der falsch zugeordneten Lese-Paare) von der Gesamtanzahl der analysierten UDI-Primer-Paare parallel beeinflusst wird. Je mehr UDI-Primer analysiert werden, desto höher kann die Gesamtkreuzkontamination sein, da mehr unerwartete Indexkombinationen zugeordnet werden können.

 

In allen Fällen wäre die tatsächliche Kreuzkontamination der Primer sogar noch geringer, wie oben angegeben. Dies liegt daran, dass die Zuordnung von Lesevorgängen zu anderen unerwarteten UDI-Primer-Paaren eine Folge von Primer-Kreuzkontamination und Index-Hopping während der Sequenzierung ist. Eine Unterscheidung zwischen diesen Ursachen ist in diesem Analyse-Setup nicht möglich.

 

Bitte beachten Sie, dass Eurofins Genomics die Kreuzkontaminationsrate für jeden einzelnen Satz von produzierten und versandten NGS-Oligonukleotiden nicht bestimmt.

 

  Gesamte Kreuzkontaminationsrate
pro UDI-Satz 
(% Gesamtlesepaare, die nicht den erwarteten UDI-Kombinationen entsprechen)
Die niedrigste gemessene Kreuzkontamination pro UDI-Kombination Referenz
Eurofins Genomics NGSgrade Oligos 2.0 Typisch 0.01 - 0.05% 0.00446% Set of 96 UDI Primer-Paaren
Eurofins Genomics NGSgrade Oligos 2.0 0.0014%
(siehe Application Note)
0.00045% Set of 14 UDI Primer-Paaren
Mitbewerber 0.0208%
(siehe Application Note)
0.00767% Set of 14 UDI Primer-Paaren

 

 

 

Reinheit und Kopplungsrate NGSgrade Oligos 2.0

Produktdaten

Eurofins Genomics verwendet ein neues und proprietäres Synthesegerät zur Herstellung der hochqualitativen NGSgrade 2.0 Oligonukleotide. Dieses Gerät ermöglicht eine unvergleichliche Kopplungseffizienz, und damit zu einem sehr hohen Prozentsatz an Vollängen-Oligonukleotiden.

Abbildung 1. Theoretische Reinheiten für NGSgrade Oligos 2.0. (A) Darstellung der theoretischen Reinheiten für Oligos unterschiedlicher Länge bei einer Kopplungsrate von 99,6 %. Diese durchschnittliche Kopplungsrate wurde auf der Grundlage einer großen und repräsentativen Stichprobe von Datenpunkten ermittelt. (B) Beispiel eines IP-RP-HPLC-Chromatogramms für einen UDI-Adapterprimer mit 72 Nukleotiden, aufgenommen bei λ = 260 nm. Für das Zielprodukt wurde eine Reinheit von 74,0 % gemessen. Die analytische IP-RP-UHPLC wurde mit einem Vanquish Horizon Duo-System von ThermoFisher Scientific durchgeführt.

 

 

Oligos für Amplikons auf dem NovaSeq (150 - 270 bp)

Adapter-Ligation-Oligos für die NGS-Amplicon-Sequenzierung auf NovaSeq

 

Hochwertige Adapter-Oligos zur Verbesserung des Multiplexings mit Proben-Tagging durch NGS auf Illumina. Sie wurden in unserem firmeneigenen NextGen-Sequenzierungslabor entwickelt und validiert:

  • 192 individuell gestaltete Tags stehen zur Kennzeichnung Ihrer Proben zur Verfügung
  • Jeder Tag besteht aus 10 Nukleotiden, die zu Ihrem templatespezifischen Forward-Primer* hinzugefügt werden*.
  • Die Tags sind mit einem minimalen Editierabstand von 4 konzipiert, um Fehlzuweisungen durch Sequenzierfehler bestmöglich zu vermeiden
  • Optimiert für Probenpools mit geringer und hoher Probenanzahl
  • Alle NGSgrade Oligos durchlaufen spezifische, kontaminationsfreie Prozesse, um höchste Reinheit und Leistung zu gewährleisten

 

Bitte verwenden Sie unsere Excel-Vorlage die auf der NGSgrade 2.0 Oligo-Bestellseite bereitgestellt wird. Diese ist speziell für die Gestaltung Ihrer Amplicon-Adapter-Ligation-Oligos kodiert.


Die entwickelten Primer können sowohl mit unserem NGSelect Amplicon Adapter Ligation-Produkt als auch mit Ihrem eigenen Sequenzierprotokoll verwendet werden.

 

*Beispiel: Beim Multiplexing von 24 Proben mit derselben zielgerichteten Sequenz muss die gleiche Forward-Primer-Sequenz 24-mal und ein Reverse-Primer verwendet werden. Das Design-Tool fügt jedem Forward-Primer einen unterschiedlichen Tag hinzu. Der Reverse-Primer erhält keine Tags.

Oligos für Amplikons auf dem MiSeq (280 - 570 bp)

2nd PCR Primer für NGS-Amplikon-Sequenzierung auf MiSeq


Die Amplicon 2nd PCR Primer sind speziell entwickelt, um das Pooling von Proben für die NGS-Sequenzierung auf Illumina-Plattformen zu ermöglichen. Sie wurden von unserem hauseigenen NextGen-Sequenzierungslabor entworfen und validiert.

 

Bei der NGS-Amplikon-Sequenzierung auf MiSeq werden Primer mit universellen Adaptern für die erste PCR benötigt.


Zum Komfort unserer Kunden fügt Eurofins Genomics diese Adapter* automatisch zu Ihren zielsequenzspezifischen Primern hinzu. Dieser automatisierte Prozess während der Online-Bestellung stellt sicher, dass Ihre Primer korrekt, validiert und optimiert sind. Bitte verwenden Sie hierfür unsere Excel-Vorlage, die auf der Bestellseite für NGSgrade 2.0 Oligos verfügbar ist.

 

Adaptersequenzen:

  • Forward-Primer-Sequenz: ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT
  • Reverse-Primer-Sequenz: GACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT

 

Die entworfenen Primer sind mit unserem NGSelect Amplicon MiSeq-Service kompatibel.

 

 

Spezifikationen NGSgrade Oligos

Was Sie von unseren NGSgrade Oligos erwarten können

 

 

Optimierte und verifizierte Produktspezifikationen:

 

  • Garantierte Reinheit von >80% durch HPLC Reinigung
  • Spezielle kreuzkontaminationsfreie Prozessabläufe nach Synthese
  • Strenge Qualitätskriterien, überprüft durch MALDI-TOF MS
  • Synthesemaßstäbe von 0.01 bis 1.0 µmol
  • Wählbares Lieferformat: Lyophilisiert oder konzentrationseingestellt

 


Minimum Ausbeuten (OD) pro Scale:

Synthesis scale
0.01 µmol
0.05 µmol
0.2 µmol
1.0 µmol
HPLC
Min. Ausbeute [OD] 1 2 4 10

 Der Synthesemaßstab kennzeichnet die verwendete Menge 3'-Base.

 


Zusätzliche kostenlose Online Funktionen

 

  • Fügen Sie eine persönliche Note zu ihrer Oligo resp. Platte
  • Berechnen Sie die Komplementärfolge
  • Auswahl unterschiedlicher Tube-Etiketten
  • Verfolgen Sie ihren Produktions- und Lieferstatus Online
  • Sehen Sie sich Ihren Bestellvorlauf unter "Meine Bestellungen" an

 

 

Literatur

 

Oligonucleotide brochure

Application Note NGSgrade Oligo 2.0 

 

 

 

 

 

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